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la RAZA, o la amplificación rápida del del cDNA termina, es una técnica usada en la biología molecular para amplificar los extremos de las transcripciones del ARN de mensajero (mRNA) usar una reacción en cadena reversa especializada de la transcripción-polimerasa ( RT-PCR ). Permite la amplificación de una parte periférica desconocida de una transcripción usar la información sabida del centro de la transcripción. Puede ser utilizada para obtener extremo (3 ' RACE-PCR) 3 el ' 5 el ' extremo (5 ' RACE-PCR) o del mRNA. Esta técnica a veces se llama el la polimerización en cadena unilateral o la polimerización en cadena anclada .
Los protocolos para la RAZA 5 ' o 3 ' diferencian levemente. 5 ' RACE-PCR comienzan a usar el mRNA como plantilla para un primer redondo de la reacción de la síntesis del cDNA (o la transcripción reversa ) usar un específico (reverso) antisentido de la cartilla del oligonucleótido que reconozca secuencia sabida en el gene del interés; la cartilla se llama una cartilla específica (GSP) del gene del y las copias la plantilla del mRNA en la dirección a los 3 ' 5 ' para generar un específico escogen el producto trenzado del cDNA. La primera síntesis de siguiente del cDNA del filamento, la transferasa terminal (TdT) del deoxynucleotidyl de la enzima se utiliza para agregar una cola homopolymeric (es decir una cadena de los nucleótidos idénticos el ' extremo a los 3 del cDNA. Una reacción de la polimerización en cadena entonces se realiza, que utiliza una cartilla específica del segundo gene antisentido (GSP2) esa los lazos a la secuencia sabida, y una cartilla universal (delantera) del general del sentido (UP) que ate la cola homopolymeric agregada al extremo de los 3 los ' extremos de los cDNAs, para amplificar un producto del cDNA 5 '.
el extremo los 3 ' RACE-PCR utiliza la cola de PolyA natural que existe en 3 ' de todos los mRNAs para preparar durante la transcripción reversa, así que este método no requiere la adición de nucleótidos de TdT. Los primeros cDNAs del filamento se generan usar Oligo-despegue - la cartilla del adaptador que complementa el estiramiento del polyA y agrega una secuencia especial del adaptador el ' extremo a los 3 de cada cDNA. La polimerización en cadena entonces se utiliza para amplificar el ' cDNA 3 de una región sabida en el cDNA específico usar un sentido GSP, y una cartilla antisentido complementaria a la secuencia agregada del adaptador.
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