El análisis de la proteína de Bradford del, también sabido pues el análisis del Bio-Rad, es un procedimiento analítico espectroscópico usado para medir la concentración de la proteína en una solución.

Principio

El análisis de Bradford, un análisis colorimétrico de la proteína, se basa en un cambio de la absorbencia en el Coomassie del tinte cuando el reactivo previamente rojo del commassie de la forma cambió y se estabilizó en azul del coomassie por el atascamiento de la proteína. Dos tipos de interacción en enlace ocurren aquí, la forma roja de tinte del coomassie primero dona su protón libre a los grupos ionizables en la proteína, que causa un disrupture del estado nativo de la proteína, y por lo tanto expone sus bolsillos hidrofóbicos. Los bolsillos hidrofóbicos expuestos en la cadena de la proteína atarán non-covalently a la región no polar del tinte vía la fuerza de van der Waals, éste colocará los grupos positivos de la amina a la proximidad con la carga negativa del tinte, y el enlace es consolidado más a fondo por la interacción iónica entre los dos. El atar de la proteína stablized la forma azul de tinte del coomassie, y la cantidad del presente complejo en la solución es una medida para la concentración de la proteína por medio de la lectura de la absorbencia.

(Limitar) la forma del tinte tiene un máximo del espectro de absorción llevado a cabo históricamente para estar en 595 el nanómetro . Las formas (desatadas) aniónicas son verdes y rojo. El aumento de la absorbencia en 595 nanómetro es proporcional a la cantidad de tinte encuadernado, y así a la cantidad (concentración) de proteína presente en la muestra.

Desemejante de la otra proteína el prueba que el análisis de la proteína de Bradford es menos susceptible a interferencia por los varios productos químicos que pueden estar presentes en muestras de la proteína. Una excepción de la nota es concentraciones elevated detergente. El detergente común tal como SDS, se podría encontrar en extractos de la proteína porque es utilizado en lysing las células interrumpiendo su bilayer del lípido de la membrana. Mientras que otros detergentes interfieren con el análisis en la alta concentración, interferencia causada por el SDS está de dos diversos modos, y cada uno ocurrió en una diversa concentración; para la concentración del SDS debajo de la concentración crítica de la micela (conocida como la CDC, 0.0667%) en una solución del dy del coomassie, tiende a atar bien con la proteína y pre-vaciar los puntos de enlace de la proteína para el reactivo del tinte, que causó una subestimación de la concentración de la proteína en la solución. Para la concentración un CMC más alto del SDS, se asoció fuerte a la forma verde de tinte del coomassie, y hace el equilibrio cambiar de puesto en producir más de la forma verde, que aumentará la absorbencia en el independet 595nm de la presencia de la proteína. La otra interferencia puede venir del almacenador intermediario usado al preparar la muestra de la proteína. La alta concentración de almacenador intermediario causará una concentración sobrestimada de la proteína debido al agotamiento de protones libres de la solución por la base conyugal del almacenador intermediario. Esto no será un problema si la concentración baja de proteína (posteriormente el almacenador intermediario) se utiliza.

Desventajas

El análisis de Bradford es linear sobre un de corto alcance, típicamente de 2ug/ml a 120ug/ml, haciendo a menudo dilusiones de una muestra de tejido necesaria antes de análisis.

Porque el análisis de Bradford esencialmente mide la cantidad de arginina y de residuos hidrofóbicos del aminoácido, la composición de aminoácido puede alterar la curva de la concentración-absorbencia dependiendo del porcentaje de la arginina o de los aminoácidos hidrofóbicos en cada proteína. Es por lo tanto necesario utilizar un estándar (e. BSA-- La albúmina del suero vacuno) de quién proteína empareja de cerca la proteína medida en la composición, solamente el error sistemático (diversa composición de aminoácido para todas las proteínas) debe ser considerada al realizar el análisis.

Procedimiento modificado de Bradford

Mucha no de las linearidades proviene el equilibrio entre dos diversas formas del tinte que es perturbado agregando la proteína. La aplicación de la ausencia de linealidad el análisis de Bradford puede ser solucionada midiendo el cociente del OD en 595 a 450 nanómetro. Este análisis modificado de Bradford es aproximadamente 10 veces más sensible y establo que el convencional.

Análisis alternativos

Los análisis alternativos de la proteína incluyen el
Espectroscopia ULTRAVIOLETA
Análisis de la proteína del biuret
Análisis de la proteína de Lowry
Análisis ácido de la proteína de Bicinchoninic
Análisis de la proteína del ámido-negro
Análisis de la proteína de O-phthalaldehyde El kit del análisis proporcionó por SIGMA es linear para las concentraciones hasta 1.

Zenithic

Governor of the Isle of Man

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