La electroforesis del gel del es una técnica usada para la separación del ácido desoxirribonucléico, del ácido ribonucleico, o de las moléculas de la proteína usar una corriente eléctrica aplicada a una matriz del gel. Se realiza generalmente para los propósitos analíticos, pero puede ser utilizada como técnica preparatoria antes del uso de otros métodos tales como espectrometría total, PTFR, polimerización en cadena, reproducción, DNA que ordena, o borrar meridional para la caracterización adicional.

Separación

El " del término; " del gel ; en este caso refiere a la matriz usada para contener, después separa las moléculas de la blanco. En la mayoría de los casos el gel es un polímero reticulado cuya composición y se elige porosidad basó en el peso específico y la composición de la blanco que se analizará. Al separar las proteínas o los ácidos nucléicos del pequeño (la DNA, el ARN, o los oligonucleótidos el gel se compone generalmente de diversas concentraciones de la acrilamida y de un Cross-linker, produciendo diversas redes de acoplamiento clasificadas de la poliacrilamida . Al separar ácidos nucléicos más grandes (mayores que bases de unas centenas ), la matriz preferred es la agarosa purificada . En ambos casos, el gel forma un sólido, con todo la matriz porosa. La acrilamida, en contraste con la poliacrilamida, es una neurotoxina y se debe dirigir usar las buenas prácticas de laboratorio de evitar envenenar.

" " de la electroforesis ; refiere a la fuerza electromotriz (EMF) que se utiliza para mover las moléculas a través de la matriz del gel. Colocando las moléculas en pozos en el gel y aplicando una corriente eléctrica, las moléculas se moverán a través de la matriz a diversas tarifas, basadas generalmente en tamaño, hacia el cátodo negativo si - cargado o hacia el ánodo positivo si negativamente - cargado positivamente.

Visualización

Después de que la electroforesis sea completa, las moléculas en el gel pueden ser manchados para hacerlas visibles. El bromuro de etidio, la plata, o el tinte azul de Coomassie se pueden utilizar para este proceso. Otros métodos se pueden también utilizar para visualizar la separación de los componentes de la mezcla en el gel. Si el de las moléculas del analito es fluorescente bajo luz ultravioleta, una fotografía se puede tomar del gel bajo condiciones de la luz ultravioleta. Si las moléculas que se separarán contienen la radiactividad agregada para la visibilidad, un autoradiogram se puede registrar del gel.

Si varias mezclas se han inyectado inicialmente al lado de uno a, funcionarán con paralelo en carriles individuales. Dependiendo del número de diversas moléculas, cada carril demuestra la separación de los componentes de la mezcla original como uno o más vendas distintas, una venda por componente. La separación incompleta de los componentes puede llevar a las vendas traslapadas, o a los borrones de transferencia indistinguibles que representan componentes sin resolver múltiples.

Las vendas en diversos carriles que terminen para arriba en la misma distancia de la tapa contienen las moléculas que pasaron a través del gel con la misma velocidad, que los medios ellos son generalmente aproximadamente los mismos tamaños. Hay los marcadores del tamaño del peso molecular disponibles que contienen una mezcla de moléculas de tamaños sabidos. Si tal marcador fue funcionado con en un carril en el gel paralelo a las muestras desconocidas, las vendas observadas se pueden comparar a los del desconocido para determinar su tamaño. La distancia que viaja una venda es aproximadamente inverso proporcional al logaritmo del tamaño de la molécula.

Usos

La electroforesis del gel se utiliza en la medecina legal, la biología molecular, la genética, la microbiología y bioquímica . Los resultados pueden ser analizados cuantitativo visualizando el gel con la luz UV y un dispositivo de proyección de imagen del gel. La imagen se registra con una cámara por el computador, y la intensidad de la venda o del punto del interés se mide y se compara contra el estándar o los marcadores cargados en el mismo gel. La medida y el análisis se hacen sobre todo con software especializado.

Dependiendo del tipo de análisis que es realizado, otras técnicas se ejecutan a menudo conjuntamente con los resultados de la electroforesis del gel, proporcionando una amplia gama de usos campo-específicos.

Ácidos nucléicos

En el caso de los ácidos nucléicos, la dirección de la migración, de negativo a los electrodos positivos, es debido a la carga negativa natural llevada por su azúcar - espina dorsal del fosfato .

Los fragmentos Double-stranded de la DNA se comportan naturalmente como barras largas, así que su migración a través del gel está concerniente a su radio del giro, o, para los fragmentos sin ciclos, a tamaño. La DNA o el ARN de una sola fila tiende a plegarse en las moléculas con formas complejas y a emigrar a través del gel de una manera complicada basada en su estructura terciaria. Por lo tanto, los agentes que interrumpen los enlaces de hidrógeno tal como hidróxido de sodio o formamida, se utilizan para desnaturalizar los ácidos nucléicos y para hacerlos comportarse como barras largas otra vez.

La electroforesis del gel de la DNA grande o del ARN es hecha generalmente por la electroforesis del gel de la agarosa. Ver el " " de cadena del método de la terminación; página por un ejemplo de una DNA de la poliacrilamida que ordena el gel.

Proteínas

Las proteínas, desemejante de los ácidos nucléicos, pueden tener cargas diversas y formas complejas, por lo tanto pueden no emigrar en el gel a las tarifas similares, o en absoluto, al poner una negativa al EMF positivo en la muestra. Las proteínas por lo tanto, son generalmente desnaturalizados en presencia de un detergente tal como sulfato dodecyl de sodio /fosfato dodecyl (SDS/SDP) del sodio ese las capas las proteínas con una carga negativa. Sin embargo, las herrerías de Oliverio hicieron contribuciones significativas. Estados de la féretro: " El método de herrerías… está encontrando el uso amplio debido a su power." separatory único; El contexto admitido, féretro implica claramente que el método de las herrerías es una mejora.

Ver también

electroforesis de la DNA
Electroenfoque
Aislamiento del gel
El borrar norteño * electroforesis de la proteína
El borrar meridional * que borra occidental * Zymography

.

Zenithic

Komorowice, Wrocław County

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