La exhibición del ribosoma del es una técnica usada para realizar la evolución in vitro de la proteína para crear las proteínas que pueden atar a un Ligand deseado . El proceso da lugar a las proteínas traducidas que se asocian a su progenitor del MRNA que se utilice, como complejo, para atar a un ligand inmovilizado en un paso de la selección. Los híbridos de la mRNA-proteína que atan bien son entonces el transcrito reverso al CDNA y su secuencia amplificada vía la polimerización en cadena . El resultado final es una secuencia del nucleótido que se puede utilizar para crear las proteínas firmemente obligatorias.
El proceso
La exhibición del ribosoma del refiere a las carpetas de la proteína a las cuales están el non- covalente ligado y generado de secuencias CDNA que contiene una secuencia del promotor de la transcripción y los extremos sabidos que serán manijas para la polimerización en cadena . Este CDNA se crea y después se transcribe en el MRNA . Se agregan el TRNA y los ribosomas que procede a traducir el MRNA a una proteína hasta que alcance la ' base artificial 3 que hace el ribosoma detenerse brevemente. La temperatura entonces se baja y la sal se agrega para hacer el complejo mRNA-ribosoma-traducido de la proteína más estable. El complejo del conjunto entonces se utiliza en el paso obligatorio de la selección.El paso siguiente en curso de exhibición del ribosoma es comenzar a seleccionar para las cosas digno de la custodia. El paso de la selección implica típicamente una columna de la cromatografía de afinidad con un lecho de resina que contiene los ligands que usted desea la proteína para atar a. Las carpetas se funcionan sobre la columna y se inmovilizan los que atan bien. Elución subsecuente de las carpetas vía altas concentraciones de la sal o los ligands móviles que complejo con el adorno obligatorio de la proteína permitiendo la disociación del mRNA. El mRNA puede entonces ser revés transcrito nuevamente dentro de cDNA, podría ser transformado vía métodos de la mutagénesis, y alimentado con el proceso con la mayor presión selectiva para aislar incluso mejores carpetas.
Ventajas de la exhibición del ribosoma
Teniendo el progenitor de la proteína atado al complejo, los procesos de la exhibición del ribosoma saltan el grano del Microarray /peptide/la separación múltiple-bien de la secuencia que es común en los análisis que implican el hibridación del nucleótido y proporcionan una manera lista de amplificar las proteínas que atan sin el descifre de la secuencia hasta que sea necesario. Al mismo tiempo, este método confía en la generación de piscinas grandes, concentradas de la diversidad de la secuencia sin boquetes y mantener estas secuencias de la degradación, del cruzamiento por hibridación, y de reaccionar con uno a las maneras que crearían boquetes del secuencia-espacio.Los métodos competentes para el in vitro de la evolución de la proteína son la exhibición bacteriófaga, la exhibición de la levadura, la exhibición bacteriana, y la exhibición del MRNA.
Citaciones
Hanes, J. Métodos, 2004, 290, pp 51-67.
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