Un microarray de la proteína del es un pedazo de vidrio en el cual diversas moléculas de la proteína se han puesto en las localizaciones separadas de una manera pedida que formaba así un arsenal microscópico. Éstos se utilizan para identificar interacciones de la proteína-proteína, para identificar los substratos de las cinasas de la proteína o para identificar las blancos de pequeñas moléculas biológicamente activas. El microarray más común de la proteína es el microarray del anticuerpo, donde los anticuerpos se manchan sobre la viruta de la proteína y se utilizan como moléculas de la captura del para detectar las proteínas de las soluciones de Lysate de la célula.

Las tecnologías relacionadas del microarray también incluyen los microarrays del tejido de los microarrays del anticuerpo de los microarrays de la DNA y los Microarrays del compuesto químico

Usos

Los microarrays (también biochip de la proteína del del, el proteinchip ) son dispositivos de la medida usados en usos biomédicos para determinar la presencia y/o la cantidad (designadas la cuantificación) de proteínas en las muestras biológicas, e. Tienen el potencial para ser una herramienta importante para la investigación de Proteomics . Generalmente una multiplicidad de diversos agentes de la captura, lo más frecuentemente anticuerpos monoclonales, se deposita en una superficie de la viruta (vidrio o silicio) en un arsenal miniatura. Este formato a menudo también se refiere como microarray (un término más general del para los dispositivos biológicos basados viruta de la medida).

Tipos de virutas

Hay varios tipos de virutas de la proteína, el ser más común virutas de la diapositiva de cristal y órdenes nanos-bien.

Producción de órdenes de la proteína

Las proteínas se pueden externamente sintetizar, purificar y atar al arsenal. Alternativo pueden ser "in-situ" sintetizado y atado directo al arsenal.

Las proteínas se pueden sintetizar con la biosíntesis, la expresión sin células o la síntesis química de la DNA. La síntesis "in-situ" es posible con los 3ultimos dos. Con la expresión sin células de la DNA, las proteínas se atan a la derecha de la ayuda después de su producción. Los péptidos químicamente procurados por síntesis del péptido de la fase sólida se atan ya a la ayuda. El deprotection selectivo es realizado con métodos litográficos o por la Punto-síntesis supuesta.

Artefactos a evitar

1) Para evitar variabilidad de los resultados cerciorarse de le para tener una lisis muy eficiente del almacenador intermediario. Utilizar las condiciones de proceso constantes de la muestra; 2) Muchos anticuerpos no trabajan bien como reactivo de la captura, incluso si trabajan bien en condiciones que borran y otras de desnaturalizaciones occidentales. Algunos anticuerpos atan a menudo mal a las proteínas intactas en un extracto de la célula; 3) Diversas proteínas tienen gusto de diversas condiciones de la solución, así que si usted no ve el atascamiento él no significan que no hay atascamiento entre los dos socios en condiciones fisiológicas; 4) Ajustar las condiciones del soluto para evitar la asociación no específica: cambiar la concentración de la sal, pH, agregar el alignate del 1%; 5) en la superficie del arsenal la proteína conjugada debe estar en la conformación correcta (es decir, doblado, no desnaturalizado), anclada por el mismo aminoácido (en la misma orientación), y sea guardada lejos de la superficie por una máquina para hacer chorizos para evitar obstáculo estérico.

Tipos de moléculas de la captura

Las moléculas de la captura usadas son lo más comúnmente posible los anticuerpos ; sin embargo, más recientemente ha habido un empuje hacia otros tipos de moléculas de la captura que son más similares en su naturaleza tal como péptidos o aptamers. Los anticuerpos tienen varios problemas incluyendo el hecho de que no hay anticuerpos para la mayoría de las proteínas y también problemas con especificidad en algunas preparaciones comerciales del anticuerpo. Sin embargo, los anticuerpos todavía representan el agente bien-caracterizado y más eficaz de la captura de la proteína para los microarrays. Recientemente, los ácidos nucléicos, los receptores, las enzimas, y las proteínas se han manchado sobre virutas y se han utilizado como moléculas de la captura. Esto permite que una variedad extensa de experimentos sean conducidos en interacciones de la proteína-proteína, y el resto de los substratos obligatorios de la proteína.

Métodos de detección

Aunque los microarrays de la proteína puedan utilizar métodos de detección similares como Microarrays de la DNA, un problema es que las concentraciones de la proteína en una muestra biológica pueden ser muchas órdenes de la magnitud diferentes de ésa para los mRNAs. Por lo tanto, los métodos de detección de la viruta de la proteína deben tener una gama de detección mucho más grande.

El método preferred de detección es actual detección de la fluorescencia . La detección fluorescente es segura, sensible, y puede tener una alta resolución. El método de detección fluorescente es compatible con los exploradores estándar del microarray, no obstante algunas alteraciones de menor importancia al software pueden necesitar ser hecho.

Ver también

Microarray del anticuerpo
Microarray del compuesto químico
Microarray de la DNA
Microarray del tejido
MicroArray y expresión de gene (MAGE)

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Zenithic

Crump, Michigan

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