Un nucleotidase es una enzima hidrolítica que cataliza la hidrólisis de un nucleótido en un nucleósido y un fosfato . Por ejemplo, convierten el monofosfato de adenosina a la adenosina, y el monofosfato de la guanosina a la guanosina .

Tienen una función importante en la digestión en que analizan los ácidos nucléicos consumidos .

Pueden ser divididos en dos categorías, basadas sobre el extremo se hidroliza que:

: 5 ' - nucleotidase -,

: 3 ' - nucleotidase -

.