El RAPD representa la amplificación al azar de la DNA polimórfica . Es un tipo de reacción de la polimerización en cadena, pero los segmentos de la DNA se amplifican que son al azar. El científico RAPD de ejecución crea varias cartillas arbitrarias, cortas (8-12 nucleótidos), después procede con la polimerización en cadena usar una plantilla grande de la DNA genomic, esperando que los fragmentos amplificarán. Resolviendo los patrones resultantes, un perfil semi-único se puede espigar de una reacción de RAPD.

No se requiere ningún conocimiento de la secuencia de la DNA para el gene apuntado, pues las cartillas atarán el en alguna parte en la secuencia, pero no está cierta exactamente donde. Esto hace el método popular para comparar la DNA de los sistemas biológicos que no han tenido la atención de la comunidad científica, o en un sistema en el cual se comparen relativamente pocas secuencias de la DNA (no es conveniente para formar un banco de datos de la DNA). Debido al hecho de que confíe en una secuencia grande, intacta de la plantilla de la DNA, tiene algunas limitaciones en el uso de las muestras degradadas de la DNA. Su energía de resolución es mucho más baja que métodos apuntados, propios de cada especie de la comparación de la DNA, tales como repeticiones en tándem del cortocircuito. Estos últimos años, RAPD se utiliza para caracterizar, y para remontar, la filogenia de la especie diversa de planta y animal.

Introducción

Los marcadores polimórficos amplificados al azar (RAPD) de la DNA son diez fragmentos de la DNA del mer (longitud de 10 nucleótidos) de la amplificación de la polimerización en cadena de segmentos al azar de la DNA genomic con la sola cartilla de la secuencia de nucleótido arbitraria y que pueden distinguir entre los individuos genético distintos, aunque no no necesario de una manera reproductiva.

Cómo trabaja

Desemejante de análisis tradicional de la polimerización en cadena, RAPD (" pronunciado; rapid") no requiere ningún conocimiento específico de la secuencia de la DNA del organismo de la blanco: las 10 cartillas idénticas del mer o no amplificarán un segmento de la DNA, dependiendo de las posiciones que son complementarias a la secuencia de las cartillas. Por ejemplo, no se produce ningún fragmento si las cartillas recocidas demasiado lejos aparte o 3 ' extremos de las cartillas no se están haciendo frente. Por lo tanto, si una mutación ha ocurrido en la DNA de la plantilla en el sitio que era previamente complementario a la cartilla, un producto de la polimerización en cadena no será producido, dando por resultado un diverso patrón de los segmentos amplificados de la DNA en el gel.

Ejemplo

RAPD es un método que mecanografía barato con todo de gran alcance para muchas especies bacterianas.

Perfiles de RAPD, ejemplo gel de poliacrilamida Plata-manchado que demuestra tres perfiles distintos de RAPD generados por primer OPE15 para los aislantes del ducreyi de Haemophilus del de Tanzania, de Senegal, de Tailandia, de Europa, y de Norteamérica.

La selección de la secuencia correcta para la cartilla es muy importante porque diversas secuencias producirán diversos patrones de la venda y permitirán posiblemente un reconocimiento más específico de tensiones individuales.

Limitaciones de RAPD l Casi todos los marcadores de RAPD son dominantes, es decir no es posible distinguir si un segmento de la DNA está amplificado de un lugar geométrico que sea heterozigótico (1 copia) u homocigótico (2 copias). Los marcadores codominantes de RAPD, observados como los segmentos diferente-clasificados de la DNA amplificaron del mismo lugar geométrico, se detectan solamente raramente.
La polimerización en cadena es una reacción enzimática, por lo tanto la calidad y la concentración de DNA de la plantilla, las concentraciones de componentes de la polimerización en cadena, y las condiciones de ciclo de la polimerización en cadena pueden influenciar grandemente el resultado. Así, la técnica de RAPD es notorio laboratorio dependiente y necesita protocolos cuidadosamente desarrollados del laboratorio ser reproductivos.
Las uniones mal hechas entre la cartilla y la plantilla pueden dar lugar a la ausencia total de producto de la polimerización en cadena tan bien como en una cantidad simplemente disminuida del producto. Así, los resultados de RAPD pueden ser difíciles de interpretar.

que desarrolla marcadores Lugar-específicos, codominantes del de RAPDs

la venda polimórfica del marcador de RAPD se aísla del gel.
Se amplifica en la reacción de la polimerización en cadena.
Se reproduce y se ordena el producto de la polimerización en cadena.
Las nuevas cartillas más largas y específicas se diseñan para la secuencia de la DNA, que se llama el marcador amplificado caracterizado ordenado de la región (SCAR).

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Zenithic

RAPD

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